Maxifusion-2000 转染试剂

Maxifusion-2000转染试剂是新一代的转染试剂，为新型高电荷密度阳离子有机大分子和阳离子脂质体按照1:1经特殊工艺配置而成，带正电的聚合物和脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成整体带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。操作极简单，重复性好，在体内转染效率高，无细胞毒性等特点。

Maxifusion-2000是一款优化后与多种细胞搭配的转染试剂，在多种细胞中有非常高的转染效率，非常适合各类病毒的包装，重组蛋白的表达和普通的转染实验。该聚合物和脂质体每相隔几个碳原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于市面上的单一聚合物转染试剂和阳离子脂质体转染试剂，而且无细胞毒性。

Maxifusion-2000转染试剂转染质粒进入贴壁培养的HEK293等细胞后，通常在24-48小时后达到比较理想的蛋白表达水平。其转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。和同类型的转染 试剂PolyjetT相比，转染GFP的效果相当，转染效果请参考下图。

产品特点 

• 卓越的转染效率

无血清/抗生素干扰；转染后无需换液；适合病毒包装和重组蛋白表达

• 高性价比

更少的DNA和转染试剂使用量

• 操作步骤简单

DNA与试剂直接混合，无需分管配置

• 应用范围广

应用范围广,贴壁/悬浮、原代/传代细胞。如A549、CHO-K1、NIH3T3等

卓越的转染效率 相比 主要竞争者

根据说明书推荐步骤转染，GFP质粒转染后24小时FACS结果

不同细胞系中使用Maxifusion-2000的转染效率

应用

使用HEK293T细胞进行的所有过表达实验，例如普通过表达蛋白进行免疫印迹或免疫共沉淀等;各类病毒包装，如慢病毒，逆转录病毒的包装;重组蛋白的表达等。以及绝大多数真核细胞:A549, B16F10, HeLa, Hepa 1-6, Hepa-1clc7, HepG2,BHK-21, C2C12, C6, CHO-K1, COS-1,COS-7, Daoy, DU 145, K562, KB, LL/2(LLC1), LNCaP-FGC,MCF-7, MEL, Neuro-2a, NIH3T3,OVCAR-3,PC-3,PC-12等。

运输储藏

4°C运输。-20°C或-80°C可储存>24个月。使用后4°C保存，效果可维持至少12个月。虽然该试剂冷冻或冷藏均不影响其转染效率，但仍建议避免反复冻融，首次使用后建议4°C保存直至用完。

实验基本流程

1、接种细胞:转染前18-24小时进行HEK293T细胞的铺板，以便在转染时，贴壁细胞的密度大约在80%左右。注:培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。

2、准备Maxifusion-2000/DNA复合物:以转染10cm培养皿(10ml培养基)为例,说明转染的具体方法。

1)将10ug质粒DNA(Total)稀释到1mL无血清DMEM培养基(在5-15ml离心管中进行，便于
混匀)，涡旋混匀。
2)将30uL转染试剂直接加入到1)中，轻度涡旋混匀。注:无需分管配制DNA和转染试剂。后进行后续试验。注:转染前无需对细胞进行换液。清的DMEM培养基的比例进行即可，具体可参照下表:
3)室温放置5-10分钟后，逐滴加入细胞培养皿中，轻轻混匀后将细胞置于培养箱。24-48小时
 

注:如果在其他培养器皿中进行转染，按照1ml培养基中加入1g质粒/3ul转染试剂/100uL无血清的DMEM培养基的比例进行即可，具体可参照下表：

注意事项

1.使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。

2.转染前细胞必须处于良好的生长状态。

3.转染前建议不要换液，转染后换液不影响转染效率。

4.需自备不含抗生素的无血清DMEM。

5.转染试剂可涡旋、离心，也可以用移液器吹打混匀或摇动混匀。

6.本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

7.本产品仅用于专业人员的科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题及解决方案

1.转染效率低

a.优化质粒与Maxifusion-2000转染试剂的比例，适当加大质粒用量。
b.应使用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，
通常宜控制在1.8-1.9范围内。
c.需用无抗生素和无血清培养液配制Maxifusion-2000转染试剂和质粒的混合物。
d.转染时细胞状态良好，细胞密度达到70-80%时最适合进行转染，过稀或过密都可能影响
转染效率。
e.转染后培养时间不足，而被误认为转染效率偏低。细胞转染后至显著表达所需培养时间通
常为24-48小时。
f.检查细胞是否支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
g.如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。启动子、复制起始位点、质粒大小都会影响基因表达水平。每次转染时，采用GFP作为对照。

2.出现一定的细胞毒性

a.转染前，细胞至少铺板12小时。
b.目的基因的表达蛋白有毒性。与空载质粒转染效果比较，以确定是否是目的基因蛋白表达
对细胞产生毒性。
如果确定有细胞毒性，可以考虑适当减少质粒用量，并按照比例减少Maxifusion-2000转染试
剂。
c.检查是否转染时细胞密度太低。
d.检查细胞是否有支原体等微生物污染。